产品货号:
GS5070
中文名称:
BsrGI限制性内切酶
英文名称:
SwiftCut BsrGI restriction endonuclease
产品规格:
30T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
简要说明:
酶切位点:
酶活定义:
产品组成:
保存:-20℃,有效期1年。
质量控制:
特别说明:
使用方法:
SwiftCut系列限制性内切酶是一系列能够在5~15分钟之内快速剪切DNA的快速酶。所有SwiftCut限制酶都适用于通用的SwiftOne缓冲液,可在统一反应体系内任意组合,无需多次单酶切或更换酶切缓冲液。SwiftCut系列限制性内切酶经过多个严格的质控环节,适用于质粒DNA、PCR产物或基因组DNA等的快速酶切。
酶切位点:
5'…T↓G T A C A…3'
3'…A C A T G↑T…5'
3'…A C A T G↑T…5'
酶活定义:
37℃条件下,在20μL通用SwiftOne反应体系中,1μL酶能够15min内完全消化1μg λDNA所需的酶量。
产品组成:
| 组分 | 规格 |
| SwiftCut BsrGI内切酶 | 30μL |
| 10×SwiftOne缓冲液 | 1mL |
保存:-20℃,有效期1年。
质量控制:
- 超长时间孵育/星号活性检测:37℃下,将1μL SwiftCut BsrGI与1μg λDNA共同温育3h,未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解。但长时间孵育可能出现星号活性。
- 酶切-连接-再酶切检测:37℃下使用10倍酶量消化底物,回收酶切产物。在22℃下使用适量T4 DNA连接酶可以将超过95%的酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后,使用相同的内切酶可以重新切开超过95%的连接产物。
特别说明:
- DNA甲基化对BsrGI酶切的影响:
Dam Dcm CpG EcoKI EcoBI 不影响 不影响 不影响 不影响 不影响 - BsrGI的同裂酶:BatAUI、Bsp1407I
使用方法:
- 在冰上依次加样配制反应体系:
成分 质粒DNA PCR产物 基因组DNA ddH2O 15μL 16μL 30μL 10×SwiftOne缓冲液 2μL 3μL 5μL 底物DNA 2μL(up to 1μg) 10μL(约0.2μg) 10μL(5μg) SwiftCut BsrGI内切酶 1μL 1μL 5μL 总体积 20μL 30μL 50μL - 以上PCR产物体系适用于经过纯化的PCR产物酶切,未纯化的PCR产物具备一定的离子强度,10×SwiftOne缓冲液加入量可适当减少至2μL,但由于DNA聚合酶同时具有外切酶活性,会影响酶切产物,因此如下一步需进行克隆等操作,建议酶切前对PCR产物进行纯化。
- 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀(切勿涡旋),然后瞬时离心以收集挂壁液滴;
- 37℃孵育15分钟(质粒),或15~30分钟(PCR产物),或30~60分钟(基因组DNA),不建议长时间酶切;
- 80℃孵育20分钟即可使酶失活,停止反应(可选)
附录参考:
常见DNA中BsrGI内切酶识别位点数:λDNA φX174 M13mp18/19 pBR322 pUC57 SV40 Adeno2 pUC18/19 5 0 1 0 0 2 5 0
双酶切或多酶切:- 每种酶的用量为1μL,并根据需要适当扩大反应体系;
- 所有酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10;
- 若所选用内切酶的最适反应温度不同,应先以最适温度较低的酶开始酶切,再添加最适温度较高的酶,以较高的温度进行孵育。
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